Revista Farmabiotec - Número 16

#16 farmaBIOTEC 41 Análisis cuantitativo: Regresión de mínimos cuadrados parciales (PLS) Para determinar la precisión del ProCellics™ Raman Analyzer, se midió un primer conjunto de muestras (conjunto de cali- bración) para crear modelos de regresión de mínimos cua- drados parciales ( partial least squares , PLS). Posteriormente, las regresiones PLS se utiliza- ron para medir nuevas mues- tras (conjunto de validación) y así determinar la precisión del modelado. En total, se constru- yeron cinco modelos PLS, uno para cada NTP y mRNA. Los resultados se muestran en la Figura 6. La linealidad observada en la línea de regresión es exce- lente y el Error Cuadrático Medio de Predicción ( Mean Square Error of Prediction , RMSEP) es de alrededor de 0.1 mM para los NTPs y 95 µg/mL para el mRNA. La Tabla 1 muestra el error rela- tivo calculado en base al RMSEP y la concentración máxima del rango de validación. Cada error relativo se determinó en 1% y 4% para los NTPs y el mRNA, respectivamente. Conclusiones En conclusión, la implementa- ción de la espectroscopia Raman demostrada en este estudio abre el camino hacia una nueva solución analítica para con- trolar las concentraciones de NTPs y ARN mensajero en reacciones de transcripción in vitro con alta precisión y eficiencia. Entre sus principales ventajas se encuentran: • Correlación directa: Establece una correlación directa entre la amplitud de las señales de pico Raman y la con- centración de cada molécula en la solución. • Especificidad superior: Ofrece una alta especificidad y precisión en la cuantificación de NTP y ARN, lo que garan - tiza mediciones exactas con cada escaneo. • Eficiente en el uso de los recursos: No se necesitan consumibles ni disolventes para las mediciones de espec- troscopia Raman, lo que la convierte en una solución rentable y sostenible. • Conservación de muestras: Las mediciones no destruc - tivas de la reacción IVT requieren volúmenes de muestra pequeños, diferenciándola de los métodos tradicionales. • Cuantificación de múltiples moléculas: La cuantifica - ción simultánea de múltiples moléculas permite un análi- sis completo en un solo instrumento, ahorrando tiempo y permitiendo una intervención rápida • Escalado: Un único método de calibración puede compartirse sin esfuerzo entre instrumentos, lo que pro- porciona la máxima adaptabilidad para transferencias de tecnología de un sitio a otro, ampliaciones o una mayor eficiencia de producción. Tecnología analítica de Proceso (PAT) Tabla 1: Error relativo calculado en base al RMSEP y la concentración máxima del rango de validación.