Revista Farmabiotec - Número 16

40 farmaBIOTEC #16 y destacar las bandas Raman de las moléculas de inte- rés. En la figura 4 se muestra una representación super - puesta de los diferentes espectros Raman obtenidos. En la imagen se puede ver de forma muy visual las diferen- tes bandas correspondientes a las diferentes vibraciones moleculares para cada molécula, lo que es una prueba fehaciente de la gran especificidad de la tecnología en cuanto a identificación de los diferentes componentes de la reacción IVT. En la siguiente figura (5) , se ha realizado una representa - ción en específico de cada uno de los componentes (ARN, ATP, CTP, GTP y UTP). Se ha incluido también una escala de azul a rojo para representar las diferentes concentra- ciones de las muestras. Se puede observar que una menor concentración de la molécula corresponde a una menor intensidad Raman, mientras que una mayor concentración da lugar a una mayor intensidad. Esta relación implica que la amplitud del pico Raman es directamente proporcional a la concentración de molécula presente en la solución. Como se puede observar es posible incluso identificar las vibraciones de algunos enlaces en concreto que aparecen en posiciones únicas de la banda, lo que vuelve a demons- trar la especificidad de la técnica. Análisis Cualitativo de los resultados: Principal Component Analysis (PCA) La realización del Principal Component Analysis (PCA) permite condensar la información del espectro en un solo dato. De esta forma podemos tener un punto de vista dife- rente de nuestro conjunto de datos e identificar patrones o tendencias. El resultado de este ejercicio viene represen- tado en la siguiente figura (6), donde se puede observar en diferentes colores las bases NTP Para la observación de este gráfico hay que entender que cuánto más cercanos estén los puntos entre dife- rentes bases, más compleja va a ser la identificación ya que las bandas Raman serán más parecidas. Al contra- rio, cuánto más separados se encuentren, significará que las bandas Raman difieren más y serán más fáciles de identificar. En este caso en concreto se pueden ver dife - rencias claras entre grupos de datos de las diferentes bases, corroborando la buena especificidad del método. De la misma manera, se puede observar un patrón de con- centraciones ya que según la concentración aumenta, los puntos se encuentran más alejados del centro siguiendo una tendencia lineal. Tecnología analítica de Proceso (PAT) Figura 4: Resultado de espectros Raman superpuestos procesados con Raman PAT Bio4C ® . Figura 5: Resultados de espectro Raman específicos para cada molécula involucrada en la reacción IVT. Figura 6: Resultados de análisis estadístico PCA.