Revista Farmabiotec Número 4

Con todo, los últimos años han sido pródigos en la aparición y desarrollo de nuevos sistemas de vectores no virales, como son distintos tipos de nanopartículas lipídicas o poliméricas, que evitan algunos de los proble- mas asociados a los vectores virales usados en terapias in vivo , como la inmunogenicidad (p.e. los basados en AAV), por lo que teóricamente podrían administrarse repetidamente o ser usados en personas que hayan tenido contacto previo con esos mismos virus. Un ejem- plo de éxito de este tipo de vectores han sido las vacu- nas de RNA, como las que se han utilizado con éxito en la actual pandemia producida por el virus Sars-Cov-2. Oficialmente, las vacunas genéticas no se consideran terapias génicas, aunque en realidad podrían conside- rarse como tales ya que no son otra cosa que moléculas con información genética que son administradas a per- sonas con finalidades médicas. En estas terapias comentadas basadas en vectores convencionales, el material genético administrado o bien permanece en forma episomal en el núcleo de las células transducidas (p.e. con los vectores AAV), o bien se inte- gra en el genoma de una forma aleatoria o semialeato- ria (p.e. cuando se usan lentivirus). Sin embargo, en los últimos años han aparecido nuevas herramientas que pueden ser dirigidas a dianas específicas del genoma, y modificarlas in situ . Estas nuevas tecnologías, conoci- das en conjunto como edición génica, abren una nueva forma, mucho más precisa, de modificar la información genética o epigenética de las células, que algunos han denominado terapia génica 2.0. Entre estas herramien- tas de edición destacan las meganucleasas, las “nuclea- sas en dedos de zinc” (ZFN), las “nucleasas de activi- dad similar a activadores de transcripción” (TALEN), o las “repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas” (CRISPR). Se trata de nucleasas que contienen elementos de reconocimiento de secuencias genéticas concretas, y que únicamente se activan cuando reconocen y se unen a estas secuencias diana, pudiendo ser diseñadas “a medida” para dirigirlas a sitios específicos del genoma en los que pueden cortar la doble cadena de ADN, lo que activará la maquinaria reparadora del ADN celular, pues de no ser reparados, estos cortes resultan letales para la célula. Esta repara- ción puede ocurrir de dos formas, en presencia de molé- culas de ADN que contengan secuencias homólogas a las regiones que flanquean el punto de corte, se puede producir una inserción limpia de la secuencia de estas moléculas de ADN donador justamente en el punto de corte. Esta sería la llamada reparación basada en homología, la más precisa y en general la más deseada. Alternativamente, en ausencia de estas moléculas donadoras, la reparación se basa en otro mecanismo reparador, mucho menos preciso, que introduce inser- ciones y/o deleciones ( indels ), y por tanto mutaciones, y que se denomina “unión de extremos no homólogos” (NHEJ). En general, estos sistemas de edición permiten una terapia génica dirigida, y podrían soslayar algunos de los inconvenientes de las terapias no dirigidas con- vencionales, aunque también tienen limitaciones, como la posibilidad de que hagan modificaciones en lugares no deseados (efectos off target ). En el caso de los siste- mas basados en CRISPR, las nucleasas utilizadas (p.e. Cas9 o Cas12) pueden realizar cortes en la doble cadena, pero también existen versiones modificadas que cortan una sola cadena de ADN o que están totalmente despro- vistas de actividad catalítica, y que pueden ser utiliza- das, unidas a otros enzimas (p.e. modificadores de bases nitrogenadas, modificadores epigenéticos, o transcrip- tasas reversas), únicamente para dirigir estas activida- des enzimáticas a lugares concretos del genoma, lo que amplia el espectro de funcionalidades a nuevas modali- dades demodificación genética como la edición de bases, el llamado “ prime editing ” o la edición epigenética, que, junto al desarrollo de nuevos vectores, en especial los no virales, prometen revolucionar en los próximos años la manera de entender y de hacer terapia génica ◉ FARMABIOTEC INVIERNO 2022 50 TERAPIA GÉNICA