Revista Farmabiotec Número 14

74 farmaBIOTEC #14 Ensayos clínicos ensayo de inmovilización de Daphnia magna tomando como referencia la guía OCDE 202, el ensayo de toxicidad aguda en embrión de pez cebra (FET) (OECD 236) o el ensayo de dis - rupción endocrina, como fases de screening primario, y ade - más puede realizar los ensayos en su forma nominiaturizada, siguiendo las guías y bajo BPLs. Entre ellos destaca el ensayo de disrupción endocrina que se describe en mayor detalle a continuación. Ensayo de disrupción endocrina Los compuestos que son disruptores endocrinos están muy extendidos en el medio ambiente y existe una creciente preocupación por los impactos ambientales que pueden generar ya que tienen la capacidad de alterar el sistema endo - crino y pueden provocar efectos adversos en el desarrollo, la reproducción, la función neurológica y/o inmune tanto en los seres humanos, como en la vida silvestre. Esta preocupación ha aumentado debido al papel fundamental que desempeñan las hormonas tiroideas durante el desarrollo. Biobide ha desarrollado, validado y publicado un ensayo en pez cebra para detectar compuestos que tienen acción de disruptores tiroideos (TD) utilizando embriones transgénicos tg(tg:mcherry), que expresan fluorescencia roja en la glándula tiroides bajo el promotor de tiroglobulina. Los aumentos en los niveles de tiroglobulina generan un aumento de la fluorescencia por medio de análisis de imáge - nes y de esta forma, la intensidad de la señal se puede evaluar in vivo para detectar y caracterizar el potencial para alterar el tiroides, ya sea directamente o después de la metabolización. Este ensayo se compone de una primera etapa para deter - minar la concentraciónmáxima tolerada (MTC), de forma que se determinen los parámetros LC50, EC50 y EC10. Para ello, los embriones de pez cebra de 48 hpf se exponen a 8 con - centraciones de los compuestos de interés y a las 120 hpf se analizan los efectos sistémicos y del desarrollo. Posteriormente, se lleva a cabo el ensayo de disrupción tiroidea basado en fluorescencia, en el que los embriones de pez cebra expresando la proteína fluorescente mcherry en la glándula tiroidea se exponen a 5 concentraciones de los compuestos de interés. Los embriones se exponen y a las 120 hpf se analizan bajo un microscopio de fluorescencia por medio de imágenes. Los datos son analizados y se determina el Benchmark Concentration (BMC) y el Índice de disrupción tiroidea (TDI). Finalmente, el estudio puede completarse con un análisis de expresión de genes como tshβ, tg y tpo para obtener una caracterización más amplia del efecto disruptor del tiroides. Conclusión El pez cebra se ha consolidado como unmodelo alternativo (NAM) esencial en las fases tempranas del descubrimiento y desarrollo de fármacos. Su relevancia biológica, rentabilidad, y eficiencia lo convierten en una herramienta invaluable para la investigación preclínica. Al proporcionar datos precisos y rápidos sobre la toxicidad y la eficacia de los compuestos, el pez cebra ayuda a acelerar el proceso de descubrimiento de fármacos, mitigando los costes y mejorando la tasa de éxito de los candidatos que avanzan a ensayos clínicos. Referencias OECD (2021), Test No. 250: EASZY assay - Detection of Endocrine Active Substances, acting through estro - gen receptors, using transgenic tg(cyp19a1b:GFP) Zebrafish embrYos, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2, OECD Publishing, Paris, https://doi. org/10.1787/0a39b48b-en. OECD (2013), Test No. 236: Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2, OECD Publishing, Paris, https://doi.org/10.1787/9789264203709-en. OECD (2011), Test No. 201: Freshwater Alga and Cyanobacteria, Growth Inhibition Test, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2, OECD Publishing, Paris, https://doi.org/10.1787/9789264069923-en. OECD (2004), Test No. 202: Daphnia sp. Acute Immobilisation Test, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2, OECD Publishing, Paris, https://doi.org/10.1787/9789264069947-en. Jaka, O., Iturria, I., Martí, C., Hurtado de Mendoza, J., Mazón-Moya, M., Rummel, C., AMJ, W., & Muriana, A. (2023). Screening for chemicals with thyroid hormone- disrupting effects using zebrafish embryo. Reproductive Toxicology (Elmsford, N.Y.), 121, 108463–108463. https://doi. org/10.1016/j.reprotox.2023.108463 Hamm, J. T., Hsieh, J.-H., Roberts, G. K., Collins, B., Gorospe, J., Sparrow, B., Walker, N. J., Truong, L., Tanguay, R. L., Dyballa, S., Miñana, R., Schiavone, V., Terriente, J., Weiner, A., Muriana, A., Quevedo, C., & Ryan, K. R. (2024). Interlaboratory Study on Zebrafish in Toxicology: Systematic Evaluation of the Application of Zebrafish in Toxicology’s (SEAZIT’s) Evaluation of Developmental Toxicity. Toxics (Basel), 12(1), 93-. https:// doi.org/10.3390/toxics12010093. Figura 4. Embrión de pez cebra transgénico expresando fluorescen- cia roja en la glándula tiroides bajo el promotor de tiroglobulina.