Revista Farmabiotec Número 12

74 farmaBIOTEC #12 se aplican técnicas de microscopía óptica y electrónica, la caracterización del nuevo compuesto será mucho más completa 3 . La microscopía óptica de células vivas nos permite estudiar las infecciones virales de manera diná- mica y a tiempo real. Por otro lado, los virus son peque - ños y dado que su tamaño va de unos pocos nanómetros a aproximadamente una micra, sólo pueden verse con detalle con la resolución que proporciona el microscopio electrónico, que consigue una magnificación y resolución espacial de más de mil veces superior a la que propor- cionan los microscopios ópticos 4 . La microscopía elec- trónica nos da detalles de cómo los virus entran en las células, cómo construyen las factorías donde replican su genoma y donde ensamblan los nuevos virus infecciosos y cómo salen de las células. Gracias a los avances téc - nicos en microscopía, estamos empezando a ser cons- cientes de la variedad y complejidad de las estructuras que los virus construyen dentro de las células 5 . Y cómo se ven afectadas por la acción de los antivirales. La primera figura de este artículo (creada con BioRender.com) resume la estrategia general a seguir para estudiar el efecto de los antivirales con técnicas de imagen. La microscopía óptica nos permite estudiar los efectos del antiviral en la progresión de la infección, bien usando virus fluorescentes o marcando compo - nentes virales con anticuerpos específicos y fluorófo - ros mediante las técnicas de inmunofluorescencia. Así podemos saber de forma rápida en cuántas células no hay señal del virus, lo que significa que la infección ha sido bloqueada por el antiviral. Si disponemos de virus fluorescentes con las técnicas de video-microscopía de células vivas podemos analizar los cambios en la pro - gresión de la infección a tiempo real. Para visualizar las infecciones con detalle, acudimos a la microscopía electrónica convencional, que conlleva el procesamiento y estudio de las muestras a temperatura ambiente. Son técnicas rápidas que permiten dar un resultado en pocos días. Si se quiere hacer un estudio a mayor resolución, se acude a la microscopía electrónica a baja tempera - tura o “criomicroscopía electrónica”. Son métodos que preservan el material biológico en un estado próximo al nativo y cuya aplicación requiere más tiempo, por lo que se aplican para estudiar detalles concretos. El carácter dinámico de la microscopía óptica puede combinarse con el detalle y resolución de la microscopía electrónica gracias la microscopía correlativa. Estas técnicas nos permiten seleccionar células con un patrón interesante en el microscopio óptico y estudiarlas en el microscopio electrónico 6 . Así podemos estudiar qué sucede dentro de las células en las que el fármaco antiviral tiene éxito y también en las que el virus no es bloqueado por el antivi - ral y por tanto obtener datos sobre cómo aparece en las células la resistencia a los antivirales 7 . En la segunda figura podemos ver un ejemplo del tipo de información que nos proporciona la microscopía elec- trónica convencional. Se trata de células Vero infectadas con SARS-CoV-2, el coronavirus causante de la Covid-19, tratadas sin y con un compuesto antiviral, la hidroxipropil- β-ciclodextrina (HβCD). Las células infectadas presentan grupos de vesículas de doble membrana (asteriscos) que constituyen el orgánulo de replicación del virus, así como numerosos virus extracelulares (flechas). Cuando son tratadas con HβCD, el orgánulo de replicación está alterado y sus vesículas de doble membrana aparecen deformes y vacías 8 . También se observan menos virus extracelulares. Otros ejemplos son: 1) la plitidepsina, compuesto antitumoral que inhibe la infección del SARS-CoV-2 y que también tiene como diana el orgánulo de replicación del virus, que no llega ni a formarse en presencia del compuesto. La microscopía Gracias a los avances técnicos en microscopía, estamos empezando a ser cons- cientes de la variedad y complejidad de las estructuras que los virus construyen dentro de las células. Y cómo se ven afectadas por la acción de los antivirales. Podemos estudiar qué sucede dentro de las células en las que el fármaco antiviral tiene éxito y también en las que el virus no es bloqueado por el antiviral y por tanto obtener datos sobre cómo aparece en las células la resistencia a los antivirales. Diagnóstico por imagen