Farmabiotec número 27

42 farmaBIOTEC #27 • LC-MS/MS identifica las PCH que ELISA no detecta, inclui - das las especies débilmente inmunogénicas y de bajo peso molecular. • El análisis de cobertura ELISA-MS, que combina la inmunocap - tura con la lectura por espectrometría de masas, permite eva- luar directamente cuántas PCHen unamuestra de proceso son detectadas por un anticuerpo ELISA determinado, generando datos que se pueden expresar como porcentajes de cobertura de proteínas individuales. Para programas donde especies específicas de PCH represen - tan riesgos para la estabilidad o la seguridad, la espectrometría de masas de impurezas biofarmacéuticas es el único método analí- tico capaz de generar la evidencia necesaria para tomar medidas al respecto. Estrategias de eliminación de HCP en las etapas posteriores del bioprocesamiento La eliminación de HCP en la purificación biológica se produce progresivamente a través demúltiples operaciones unitarias, y los datos de LC-MS/MS son idóneos para optimizar este proceso. Al generar datos de identidad y cuantificación en cada etapa de purificación, es posible rastrear los HCP individuales a lo largo de la cadena de producción, identificar qué etapas proporcionan la mayor eliminación para cada especie y priorizar las modificacio - nes del proceso en función de la identidad de las impurezas per- sistentes, en lugar de basarse únicamente en los valores totales de ELISA. Las estrategias de eliminación de HCP en el procesamiento posterior se guían por las propiedades fisicoquímicas (pesomole - cular, punto isoeléctrico, hidrofobicidad y asociación con el pro - ducto) de los HCP específicos que sobreviven a la purificación ini - cial. La optimización basada en datos, utilizando perfiles de HCP derivados de LC-MS/MS, puede orientar los ajustes específicos: • La cromatografía de intercambio iónico, el pH y las condicio - nes de fuerza iónica pueden ajustarse para aprovechar las diferencias de carga entre las proteínas de la célula huésped persistentes y el fármaco. Este ajuste solo es posible cuando se identifican las especies específicas y se dispone de los datos del punto isoeléctrico. • Los pasos de exclusión por tamaño pueden ajustarse en fun - ción de la distribución del pesomolecular de las especies copu- rificadas, utilizando la identidad a nivel de proteína y la informa - ción de masa. • Las proteínas de la célula huésped que se asocian estrecha - mente a la proteína del fármaco (denominadas proteínas de la célula huésped "acompañantes") son particularmente difíciles de eliminar. La identificación de estas especies en las distintas etapas de purificación permite reconocer el problema y redise - ñar las operaciones unitarias afectadas. • En los casos en que las proteínas de la célula huésped especí - ficas sean estructuralmente similares a la proteína del fármaco y resistan la eliminación, los datos de identidad derivados de LC-MS/MS pueden respaldar la decisión de implementar estra - tegias de inactivación génica en la línea celular huésped. La combinaciónde ELISApara elmonitoreode la consistenciadel proceso y LC-MS/MS para la eliminación de HCP a nivel molecular en la evaluación de productos biológicos se ha aplicado en solicitu - des de licencia regulatoria, proporcionando el nivel de comprensión del proceso que requieren losmarcos regulatoriosmodernos. Expectativas regulatorias para el monitoreo de profesionales de la salud: FDA, EMA y USP <1132> La supervisión regulatoria de la FDA y la EMA sobre los HCP no establece límites numéricos fijos para los HCP residuales en el producto final. En cambio, ambas agencias exigen a los fabrican - tes que demuestren que el monitoreo de HCP en la fabricación biofarmacéutica se basa en métodos analíticos adecuados y que los niveles de impurezas se reducen hasta un nivel compatible con la calidad del producto y la seguridad del paciente. El riesgo asociado a losHCP residuales depende del contexto clínico: dosis, vía de administración, población de pacientes y la identidad y pro- piedades funcionales de las impurezas específicas presentes. La USP <1132> sobre proteínas de células huésped (el capí - tulo de la Farmacopea de los Estados Unidos sobre la medición de HCP residuales en biofármacos) reconoce explícitamente la LC-MS como complementaria a la ELISA para la caracterización de HCP. La evaluación del riesgo de HCP en productos biológicos, según las expectativas actuales, integra la persistencia a través de la purificación, la actividad funcional, la exposición del paciente y los mecanismos de asociación del producto, evidencia que una estrategia combinada de detección de HCP mediante ELISA y LC-MS/MS está diseñada específicamente para generar. En AMSbiopharma, apoyamos el análisis de proteínas de célu - las huésped en todas las etapas del desarrollo biofarmacéutico, desde la caracterización inicial de HCP hasta la caracterización del proceso de purificación y el apoyo para la presentación regu - latoria, utilizando plataformas avanzadas de UHPLC-MS/MS con flujos de trabajo de adquisición DIA. Referencias • Pilely K, Johansen MR, Lund RR, Kofoed T, Jørgensen TK, Skriver L, Mørtz E. Monitoring process-related impurities in biologics-host cell protein analysis. Anal Bioanal Chem. 2022 Jan;414(2):747-758. doi: 10.1007/s00216-021-03648-2. • Seidel JD, Condina MR, Klingler-Hoffmann M, Young C, Donnellan L, Kyngdon C, Hoffmann P. Development of an Optimized LC-MS Workflow for Host Cell Protein Characterization to Support Upstream Process Development. J Proteome Res. 2025 Jan 3;24(1):234-243. doi: 10.1021/acs.jproteome.4c00637. • Tank P, D'Souza F, Kayalvizhi N, Rameshkumar N. Redefining biologics safety through advanced analytics: MS-based host cell protein profiling. Trends Biotechnol. 2026. doi: 10.1016/j. tibtech.2026.05.011. Biofármacos